サイクル前の3分

PCRは、熱変性・アニーリング・伸長と、温度を変化させることを、30~40サイクル繰り返したりしますが、そのサイクルの前の熱変性が意外とカギになることがあります。


とある論文で、熱変性させないといけない酵素付きのDNAポリメラーゼを使ってPCRをやっているのを見かけました。PCRサイクル前に10分間の熱変性を行っているのは、そのDNAポリメラーゼを使っているからだと思いました。

酵素修飾のない別の酵素を使い、その10分を1分に省略した方法でPCRしたところ、


全くバンドが出ませんでした。


なんでやねん。
(＠_＠;)



いろいろ考え、多くの時間とDNAポリメラーゼを無駄にした結果、



もしかして、あの10分には、他の意味があるのでは・・・？と思い、でも、DNAポリメラーゼがへたるのが、心配だったので、3分だけ、サイクルの前に熱変性をかけることにしました。



す、すると・・・。


バンドが出ました！！！

!(^^)!


身近な教科書を読みなおしてみたら、「変性しにくい配列の時は、熱変性の温度を上げるか、サイクルの前に、数分間の変性を行うとよい場合がある」と書いてありました。

ふむふむ。



・・・以上、困った時は基本に帰ろう、というお話でした。